Конфликты в недоросле: Каковы особенности конфликта по комедии Недоросль (Фонвизин Д. И.) 👍

Содержание

Образы комедии Д.И.Фонвизина «Недоросль». Основной конфликт комедии, её проблематика (урок литературы в 7 классе)

Конспект урока литературы для 7 класса.

Составила: Климова Александра Владимировна

Тема: Образы комедии Д.И.Фонвизина «Недоросль». Основной конфликт комедии, её проблематика.

Цель:

выявить особенности конфликта пьесы, выявить сущность второстепенных персонажей;
формировать навыки выразительного чтения, чтения по ролям, работы с учебником, таблицами;
формировать нравственно-эстетические представления учащихся в ходе выявления лексического значения слова «резонер».

УМК: Литература: учебник для 7 класса общеобразовательных учреждений: в 2 ч. / авт. – сост. Г.С.Меркин. – М.: ООО «Русское слово – учебник», 2013 (ФГОС. Инновационная школа)

ХОД УРОКА.

І. Организационный момент.

II. Изучение нового материала.

1.Сообщение темы, цели, плана урока.

2.Работа над темой урока.

2.1.Основа сюжета комедии.

В основу сюжета «Недоросля», согласно традиции классицизма, положена любовная интрига.

— Какова она в комедии?

2.2. Сообщение о Софье.

У Софьи, племянницы Стародума, есть возлюбленный (Милон), которому она обещала руку и сердце, однако Простакова прочит ей в мужья своего брата Скотинина. Из письма Стародума Простакова и Скотинин узнают, что Софья — богатая наследница; и теперь к ней сватается ещё и Митрофан, поощряемый к женитьбе матерью, Простаковой.

Софья умна, насмешлива, искренна, чувствительна и добра.

2.3. Слово учителя.

София в переводе с греческого означает «мудрость». Однако имя героини получает в комедии особый оттенок: мудрость Софьи — не рациональная, не мудрость ума, а мудрость души, сердца, чувства, мудрость добродетели.

Софья происходит от честных дворян, которые дали ей образовав (она читает по-французски сочинение Фенелона о воспитании девиц). Её простые чувства человечны: почет и богатство, считает она, должны доставаться трудами, девушке приличны кротость и послушание старшим, но любовь свою она может и должна отстаивать.

Положительные персонажи группируются вокруг Софьи и активно содействуют ее освобождению из-под мелочной и корыстной опеки Простаковой. По ходу действия рушатся преграды к браку Софьи с Милоном, а имение Простаковой попадает под опеку властей.

Однако история злоключений Софьи составляет лишь фон, на котором разыгрывается главный конфликт пьесы — общественно-политический, конфликт между крепостниками и просвещенными дворянами. Чтобы проследить развитие этого конфликта, необходимо обратиться к сюжету. В комедии несколько сюжетных линий, в каждой из них обозначена определённая проблема. Одной из ключевых проблем комедии является проблема воспитания.

— Кто играет роль учителей в комедии?

2.4.Сообщения учащихся о Вральмане.

2.5. Слово учителя.

Фонвизин высмеивает не столько Вральмана, сколько тогдашнюю моду на иностранных учителей, многие из которых не только были никуда не годными педагогами, но и оказывались плутами.

Фигура учителя-иностранца, не сведущего в науках, станет чуть ли не обязательным элементом русской комедии после Фонвизина. По изданному в середине XVIII в. указу иностранцы, желавшие стать учителями в частных домах или содержать пансионы, обязаны были сдавать экзамены в Московском университете или в Петербургской академии наук. Лица, принимавшие иностранцев для обучения детей без аттестата, подвергались штрафам. Значит, все сделано в обход закона; полиция не следит за исполнением указа, и это тем более плохо, что, по мысли Фонвизина, невежа-иностранец, обучающий помещичьего сына, неумолимо приводит своего питомца к нравственной деградации, тогда как правильное воспитание — залог пробуждения в человеке высоких добродетелей и гражданских доблестей.

2.6. Сообщение о Цифиркине.

2.7. Слово учителя.

Фамилия не только указывает на занятие Цифиркина, но и напоминает о «цифирных школах», открытых по приказу Петра I в 1714 г. На примере Цифиркина показано, как ценятся заслуги воинов, отдавших двадцать лет службе государю и вынужденных, выйдя в отставку, влачить жалкое, нищенское существование. Цифиркин вполне оправдывает рассуждение Стародума о том, что просвещение души выше просвещения ума, выше образованности.

2.8.Сообщение о Кутейкине.

2.9. Слово учителя.

Фамилия указывает на род занятий («кутья» — поминальная трапеза, рис с изюмом; место, на которое в церкви ставится кутья, — «кутейник»). Речь Кутейкина пестрит вызубренными цитатами из церковных текстов.

«Библейское» выражение, которое он заставляет Митрофана повторить: «Аз есмь скот», — непосредственно восходит к «Естественной истории» Бюффона, французского натуралиста, биолога, математика, естествоиспытателя и писателя XVIII в. , и имеет прямое отношение ко всей комедии. Согласно Бюффону, человек — высокоорганизованное животное, наделенное разумом и душой. Если рассудок управляет человеком не больше, чем скотом, то человек «оскотинивается», что и происходит с Митрофаном, Простаковой и Скотининым.

— Можем ли мы назвать «учителей» Митрофана только отрицательными персонажами?

Судить однозначно героев не следует. В сценах, связанных с учителями Митрофана, переплетается комическое и трагическое, высвечиваются проблемы воспитания и образования дворян.

— Как Простакова относится к воспитанию своего сына?

2.10.Выразительное чтение по ролям явления 7, действия 3.

Она искренне убеждена, что науки не нужны, и стремится оградить сынка от напрасных усилий.

2.11. Слово учителя.

В комедии сталкиваются два типа воспитания: «старинное» и новое, послепетровское. Идеал Простаковой — духовный застой. Фонвизин идёт дальше — он связывает проблему воспитания с социальными проблемами комедии. В этом смысле очень значимы заключительные слова Стародума: «Вот злонравия достойные плоды!» Тем самым плоды дурного воспитания связываются с влиянием крепостного права, которое одинаково пагубно как для народа, так и для дворянства.

2.12. Сообщение «историка» о законе «О вольности дворян…» (1762).

Причина «злонравия» Простаковой — превратное понимание екатерининского закона «О вольности дворян…» (18 февраля 1762 г.). Некогда Петр I узаконил обязательную 25-летнюю службу дворян, и это стало нравственно-юридическим оправданием для помещиков, имеющих крепостных. Дворянин служил государству и отечеству, крестьянин дворянину; жестокие помещики должны были подвергаться опекунству. Екатерининский указ формально освободил дворянина от обязанности служить государству; и хотя государева служба по-прежнему считалась почетным долгом дворянства, делом чести, тем не менее моральное право дворянина на владение крестьянами (при сохранении юридического и фактического прав) становилось сомнительным. Большинство дворянства поняло его как полную, безотчетную власть над крепостными.

Противостоят Простаковой, Скотинину положительные герои Стародум, Правдин, Милон.

2.13. Слово учителя.

Стародум — герой-резонёр.

Резонёр — персонаж литературы эпохи классицизма (особенно комедий), не принимающий активного участия в развитии действия, но призванный увещевать или обличать других героев, высказывая нравоучительные — с точки зрения автора — суждения. Моральные сентенции резонёра, в которых выражается авторская точка зрения, в «Недоросле» становятся формой изложения политической программы.

В качестве прототипов образа Стародума называли воспитателя Павла I графа Н.И.Панина, масона-просветителя Н.И. Новикова. Фамилия Стародум означает, что носитель следует не новым нравам современного света, но принципам Петровской эпохи, исказившимся при Екатерине II.

— Когда появляется Стародум в комедии?

В комедии Стародум появляется в 1 явлении 3 действия, когда конфликт обозначен и окружение Простаковой выявило себя.

— В чем заключается роль героя?

Роль Стародума заключается в том, чтобы избавить Софью от тиранства Простаковой, дать надлежащую оценку ее поступкам, воспитанию Митрофана и провозгласить разумные принципы государственного устройства, истинные основы нравственности и просвещения.

3.Исследовательская работа с текстом.

3.1. Заполнение правой части таблицы.

План	Примеры
Родословная Стародума	«Отец мой у двора Петра Великого»
Воспитание Стародума	«Отец непрестанно мне твердил одно и то же: имей сердце, имей душу, и будешь человек во всякое время»
На военной службе. Отставка	«Многие случаи имел я отличить себя. Такое неправосудие растерзало мое сердце, и я тотчас взял отставку. Любочестивый человек ревнует к делам, а не к чинам»
Отношение к службе при дворе, к власти	«Лучше вести жизнь у себя дома, нежели в чужой передней. Великий государь есть государь премудрый. Достойный государь стремится возвысить души своих подданных»
Рассуждения о современной жизни
О подлинной знатности	«Одно почтение должно быть лестно человеку — душевное; а душевного почтения достоин только тот, кто в чинах не по деньгам, а в знати не по чинам»
О воспитании молодого дворянина	«Чтоб в достойных людях не было недостатку, прилагается ныне особливое старание о воспитании… Оно должно быт залогом благосостояния государства»
О добродетели и благонравии как нравственных основах личности	«Прямое достоинство в человеке есть душа. .. Главная цель всех знаний человеческих — благонравие» «Без благонравия никто не может выйти в люди»
О крепостном праве	«Угнетать рабством себе подобных беззаконно»

3.2. Итоги работы. Сообщение учащегося по материалам таблицы.

— Нужны ли такие люди, как Стародум, государству?

Государство не нуждается в людях, подобных Стародуму, оно отличает лишь «случайных», то есть попавших в случай «любимцев». Государство дает власть простаковым и скотининым, уверенным, что они имеют право не только управлять, но и владеть человеческими душами.

3.3. Сообщение учащегося о Милоне.

3.4. Слово учителя.

Милон развивает идеи просвещения и «добродетели» применительно к военной области. В разговоре со Стародумом раскрываются представления Милона о «чести», «благородстве», «душе», «сердце», «храбрости» и «неустрашимости». Истинная неустрашимость коренится «в душе» и «обручена» не столько с личной славой, сколько со славой отечества. Рассуждения Милона согласны со взглядами Стародума –и с идеями самого автора. Рассуждения Милона близки к идеям А.В. Суворова, который видел в неустрашимости высшее воплощение духа военачальника и высшую форму государственной доблести.

Фамилия Правдин, как полагают, заимствована из журнала «Трутень» Л Н. Новикова. Одно из писем о бедственном положении крестьян подписано: «Слуга ваш Правдин».

Правдин появляется в доме Простаковых как чиновник, имеющий веление «объехать здешний округ»; одновременно, как человек и гражданин, он «из собственного подвига сердца» наблюдает за деревенской жизнью «злонравных невежд, которые, имея над людьми своими полинную власть, употребляют ее во зло бесчеловечно». Правдин не может исполнить свою миссию до тех пор, пока Простакова не окажет первых признаков «бешенства», «от которого могли бы пострадать подвластные ей люди», ибо только после этого она подпадает под действие закона об обязанностях наместника 1775 г. Предназначение Правдина — не просто осудить порок с высоты представлений о долге дворянина, но наказать его силой данной ему власти.

III. Подведение итогов урока.

— Какие идеи и проблемы находят отражение в комедии?

Это идеи самого автора. Просвещение ума не равносильно просвещению души, и как в гражданской, так и в военной области человек должен стремиться к «добродетели», заложенной в нем от природы, но подлежащей просвещению и воспитанию. Правильное воспитание граждан – залог благополучия государства.

IV. Домашнее задание.

1.Повторить признаки классицизма.

1 вариант. Заполнить вторую часть таблицы «Речь отрицательных и положительных персонажей» примерами из текста.

2 вариант. Заполнить третью часть таблицы «Манера речи Цифиркина, Кутейкина, Вральмана, Еремеевны».

2.Индивидуальные задания:

— подготовить сообщение о Митрофане;

— подготовить выразительное чтение фрагмента поэмы Н. А.Некрасова «Современники» («пёстрый галстук с чёрным фраком…»)

Использованная литература:

Уроки литературы. К учебнику «Литература. 7 класс» (авт. – сост. Г.С.Меркин): методическое пособие /Ф.Е.Соловьева; под ред. Г.С.Меркина. – М.: ООО «Русское слово – учебник», 2012

Классицизм в драматургии Комедия «Недоросль» Фонвизина (Недоросль Фонвизин)

1. Конфликт комедии «Недоросль».
2. Традиции классицизма и новаторство Д. И. Фонвизина.
3. «Недоросль» — реалистическая комедия.

Литература XVIII века во время всеобщего национального подъема сформировала в обществе гражданское сознание. Классицисты пропагандировали идеи равенства людей, гуманизм, принцип общей пользы, ответственности властей перед народом. Они считали своим долгом принести пользу отечеству. Классицисты стремились к правдивому изображению жизни, говорили об актуальных проблемах общества, им присущи гражданский пафос, патриотизм. Но драматургия того времени обогащалась и произведениями, выходящими за рамки классицизма. Такова комедия Д. И. Фонвизина «Недоросль». Комедия была завершена в 1781 году. Пафос ее определила политическая острота и приверженность Фонвизина идеалам свободы человека.

Главная тема комедии, ее конфликт обозначен автором уже в самом начале, это — произвол помещиков и бесправие крепостного. Борьба прогрессивного дворянства с крепостниками—драматический конфликт «Недоросля». На стороне передового дворянства выступают Правдин и Стародум, крепостники — Простаковы и Скотинины. Фонвизин убеждает нас, что крепостничество губительно, с ним надо бороться. Оно развращает самих крепостников, которые теряют свои человеческие качества в обращении с крепостными, чувствуют себя всесильными. Автор хотел показать в своем произведении поступки и мораль крепостников, порожденные крепостным правом. Именно крепостнический произвол, а не борьба за руку Софьи — главная тема «Недоросля». Изображение претендентов на ее руку — еще один случай внимательно рассмотреть представителей «благородного сословия», изображенных в комическом свете. Любовный сюжет, по мнению Фонвизина, не может быть осно — вой драматического произведения. Его основой стал конфликт эпохи.

Литературовед Г. П. Макогоненко считает, что «Недоросль» — политическая комедия, так как новаторские черты в ней определили именно политические убеждения автора. Здесь есть сюжет, передающий реальный исторический конфликт; положительные герои с чертами дворянских просветителей.

Пьеса продолжает традиции классицизма. По мнению Г. А. Гуковского, художественное мышление Фонвизина всегда «сохраняло явственный отпечаток этой школы». «Недоросль» — явление позднего русского классицизма, который испытал влияние просветительской идеологии. Это произведение сочетает в себе трогательное и комическое, разрушает привычные жанровые формы. Характеры героев сложны, противоречивы, отсутствует их деление только на положительных и отрицательных, как того требовали принципы классицизма. Но положительные герои, следуя канонам классицизма, в «Недоросле» имеют одну характерную черту. Власть традиций классицизма сохранилась в говорящих фамилиях героев, в сохранении симметрии в распределении отрицательных и положительных персонажей. Речь героев в пьесе передает характеры действующих лиц, но герой-резонер, в классицистических произведениях — носитель мнения автора, тоже присутствует, это благородный Стародум. Главная идея классицизма — идея просвещения. В «Недоросле» же она получает иную трактовку: просвещение важно, но добродетель важнее ума. Триединство времени, места и действия нарушено: вместо одной проблемы автор затрагивает целый ряд одинаково важных.

Фонвизинский реализм — правдивость, историческая конкретность образов, особенно ярко проявил себя в создании характеров Еремеевны и Простаковой, показав сложность их натуры. Образы Стародума и Правдина — тоже живые характеры, читатели даже «узнавали» их прототипов, дворянских просветителей. Реализм помог Фонвизину отойти от литературных штампов, автор первым сделал шаг к созданию героя-передового деятеля. Стародум, Правдин и Милон выписаны в общих чертах, без подробностей биографии, внутреннего мира. Но образ Стародума в этом плане более значителен.

Фонвизин создал новый тип реалистической комедии: положил не готовый сюжет в ее основу, а реальный исторический конфликт, который затрагивает всех героев. Конфликты в доме, по мысли автора, — это отражение конфликтов в стране. Поведение Простаковой, например, исходит из указа о вольности дворянской. Осуждение ее значит то, что в ее лице осуждается крепостничество. Но высокое содержание не означает для автора отказ от комического. Но это комедия обличительная, а порой и с горькой иронией. С «Недоросля» начинается русская общественная комедия. Фонвизин придал комедии социальную глубину и резкую сатирическую направленность. Автор обличает порок — крепостническую практику, дворянское «злонравие» и стремится показать его причины: неправильное воспитание, невежество людей.

По словам Г. А. Гуковского, «Недоросль» — «полукомедия, полудрама». Жанровое своеобразие произведения в том, что основа пьесы — классицистическая комедия, обновленная серьезными и трогательными сценами: беседой Правдина со Стародумом, разговорами Стародума с Софьей и Милоном. Финал сочетает морализаторство и трогательность. Простакову постигло наказание, но ее жалко.

Традиции Фонвизина продолжили его последователи — А. С. Грибоедов со своим «Горем от ума» и Н. В. Гоголь с «Ревизором». Гоголь называл комедии Фонвизина и Грибоедова самыми яркими произведениями: «В них уже не легкие насмешки над смешными сторонами общества, но раны и болезни нашего общества… Обе комедии взяли две разные эпохи. Одна поразила болезни от непросвещения, другая — от дурно понятого просвещения».

Образы комедии Д.И. Фонвизина «Недоросль». Основной конфликт и проблематика. | План-конспект урока по литературе (8 класс) на тему:

МБОУ «Борисовская средняя общеобразовательная школа №1 имени Героя Советского Союза А.М. Рудого»

Галуцких Наталья Андреевна, учитель МБОУ «Борисовская средняя общеобразовательная школа №1 им. А.М. Рудого»,

русского языка и литературы,

п. Борисовка Белгородской обл.

Аннотация: урок литературы в 8 классе

Образы комедии Д. И. Фонвизина «Недоросль». Основной конфликт и проблематика.

Цели:

Выявление особенностей конфликта пьесы, сущности второстепенных персонажей.
Развитие навыков выразительного чтения, чтения по ролям, работы с таблицей.
Формирование нравственно-эстетических представлений учащихся в ходе выявления лексического значения слова резонер.

Ход урока

– 18 век – особое время в истории России. Его принято называть эпохой Петра I, временем преобразований, утверждением мощи государства Российского.

В послепетровскую эпоху наступает новое время и для русской литературы. Она бережно хранила великие завоевания своих предшественников, и прежде всего, это относится к сохранению идеи патриотизма.

Сегодня мы будем говорить с вами о комедии Д.И. Фонвизина «Недоросль». Давайте же вспомним, что мы уже знаем об этой пьесе, и как в ней отражены основные черты литературы той эпохи.

Ответы учащихся ( написал Д.И. Фонвизин, это комедия о дворянстве, основными темами являются: тема крепостного права, тема отечества и служения ему, тема воспитания и тема придворного дворянства).

— Скажите, а что еще вы знаете о литературе 18 в. ?

Ответы учащихся ( для литературы этого периода характерно так называемое «обмирщение»,т.е. она становится менее религиозной и все больше светской, то общественной; также в 18 веке возникло такое лит. направление как КЛАССИЦИЗМ).

— Что такое классицистическая комедия? Каким требованиям она должна была соответствовать?

Оформление признаков классицистической комедии в виде кластера (по группам).Готовые варианты прикрепляются на доску. Обсуждение работы и выявление признаков в пьесе. (Вполне в соответствии с правилами трех единств действие пьесы происходит в усадьбе госпожи Простаковой в течение одного дня, и все события завязаны в один узел (единство места, времени и действия). В плане композиции писатель тоже достаточно четко придерживается традиции: персонажи четко делятся на отрицательных, непросвещенных и положительных, образованных, группируясь вполне симметрично: четыре на четыре. В центре группы отрицательных героев находится госпожа Простакова – все остальные персонажи этой группы так или иначе соотносят себя с ней: «женин муж», «сестрин брат», «матушкин сынок». Во главе положительного лагеря стоит Стародум, к которому прислушиваются Правдин, Милон и Софья. Отличие системы образов от традиционной проявляется в том, Фонвизин вводит в систему персонажей и ряд второстепенных лиц, которых сложно отнести к положительным либо к отрицательным (Еремеевна, Тришка, Цыфиркин, Кутейкин, Вральман).)

— Сегодня мы с вами подробно остановимся на героях этого произведения.

В основу сюжета «Недоросля», согласно традиции классицизма, положена любовная интрига.

— Какова она в комедии? С кем из героев связана?

Сообщение о Софье.

У Софьи, племянницы Стародума, есть возлюбленный (Милон), которому она обещала руку и сердце, но Простакова прочит ей в мужья своего брата Скотинина. Из письма Стародума Простакова и Скотинин, узнают, что Софья богатая наследница и теперь к ней сватается еще и Митрофан.

София в переводе с греческого означает «мудрость». Она умна, насмешлива, искренна, чувствительна и добра. Софья происходит от честных дворян, которые дали ей образование. Она считает, что почет и богатство должны доставаться трудами. По ходу действия рушатся преграды к браку Софьи с Милоном, а имение Простаковой попадает под опеку властей.

Но история Софьи является лишь фоном, на котором разыгрывается главный конфликт пьесы – общественно-политический, конфликт между крепостниками и просвещенными дворянами. Чтобы проследить развитие этого конфликта, необходимо обратиться к сюжету.

В комедии несколько сюжетных линий, в каждой их них обозначена определенная проблема. Одной из ключевых проблем является проблема воспитания.

— С какими же образами комедии связана эта тема?

— Кто играет роль учителей в комедии?

Сообщение о Вральмане .

Учитель-проходимец, человек с лакейской душой, бывший кучер Стародума. Лишившись места вследствие отъезда Стародума в Сибирь, он пошёл в учителя, так как не мог найти себе места кучера. Естественно, что такой невежественный «учитель» ничему не мог научить своего ученика. Он и не учил, потакая лени Митрофана и пользуясь полным невежеством Простаковой. Вральман – резко отрицательная характеристика, намекающая на то, что носитель такой фамилии – лгун

Слово учителя.

Фонвизин высмеивает не столько Вральмана, сколько тогдашнюю моду на иностранных учителей, многие из которых были не только никуда не годными педагогами, но и оказывались плутами.

Сообщение о Цыфиркине.

Отставной солдат Цыфиркин — человек, имеющий ряд хороших качеств. Он трудолюбив: «праздно жить не люблю»,— говорит он. В городе он помогает приказным «то счётец проверить, то итоги подвести», а «на досуге ребят обучает». (Фонвизин нарисовал образ Цыфиркина с явным сочувствием. Цифиркин – эта фамилия намекает на специальность учителя математики.

Слово учителя.

На примере Цыфиркина показано, как ценятся заслуги воинов, отдавших 25 лет жизни службе государю и вынужденных, выйдя в отставку, влачить жалкое, нищенское существование.

Сообщение о Кутейкине.

Это недоучившийся семинарист, вышедший из первых классов духовной семинарии, «убояся бездны премудрости». Но он не лишен хитрости. Читая с Митрофаном часослов, он не без умысла выбирает текст: «Аз же семь червь, а не человек, поношение человеков», да ещё растолковывает слово червь — «сиречь (т. е.) животина, скот». Как и Цыфиркин, он сочувствует Еремеевне. Но Кутейкин резко отличается от Цыфиркина своей жадностью к деньгам. В языке Кутейкина сильно подчёркнуты церковнославянизмы,- вынесенные им из духовной среды и духовной школы.

Слово учителя

Кутейкин – от устаревшего слова «кутья» — церковное кушанье, намёк на то, что Кутейкин – выходец из церковных служителей.

— Можем ли мы назвать «учителей» Митрофана только отрицательными персонажами? (Судить однозначно героев не следует. В сценах, связанных с учителями Митрофана, переплетаются комическое и трагическое.)

— Как Простакова относится к воспитанию своего сына?

Выразительное чтение по ролям Д.3, явл.7

Она искренне убеждена, что науки не нужны, и стремиться оградить сына от напрасных усилий.

Слово учителя

В комедии сталкиваются 2 типа воспитания: «старинное» и «новое», послепетровское. Идеал Простаковой – духовный застой. Защищая свою жестокость и самодурство, Простакова говорит: «Разве я не властна и в своих людях?». Ей возражает благородный, но наивный Правдин: «Нет, сударыня, тиранствовать никто не волен». И тут она неожиданно ссылается на закон: «Не волен! Дворянин, когда захочет, и слугу высечь не волен; да на что ж дан нам указ-то о вольности дворянства?». Изумленный Стародум и вместе с ним автор восклицают только «Мастерица толковать указы!»

Сообщение «историка» о законе «О вольности дворян…»(1762).

Манифест о вольности дворянства

01 марта 1762 г.

18 февраля (1 марта) 1762 г. Пётр III издал Манифест «О даровании вольности и свободы всему российскому дворянству». Закон расширил сословные права и привилегии русских дворян, а также отменил обязательную гражданскую или военную службу, введённую Петром I.

Основные положения Манифеста были подтверждены в Жалованной грамоте дворянству в 1785 г.

Согласно Манифесту Петра III, все дворяне освобождались от обязательной гражданской и военной службы; состоявшие на государственной службе могли выходить в отставку, кроме офицеров в военное время. Дворяне получили право беспрепятственно выезжать за границу, но обязаны были по требованию правительства, «когда нужда востребует», возвращаться в Россию.

В Манифесте были и определённые ограничения, которые касались дворян, находившихся на военной службе и не дослужившихся до офицерского звания: увольнение могли получить только те, кто прослужил на действительной службе не менее 12 лет.

Единственной сословной обязанностью провозглашалось получение достойного образования: дома, в российских или европейских учебных заведениях.

Манифест объявлял службу почётным долгом дворянства и призывал её продолжать. Однако, воспользовавшись разрешением, многие дворяне сразу после обнародования документа подали прошения об отставке. За десять лет с момента опубликования манифеста с государственной службы уволилось около 7,5 тыс. человек, причём основную массу отставных составили военные.

Большинство дворянства поняли этот закон как полную, безотчетную власть над крепостными.

Но были и такие люди, которые совершенно иначе смотрели и на крепостное право, и на образование, и на права и обязанности Человека. Есть ли такие люди в пьесе?

Противостоят Простаковой, Скотинину положительные герои Стародум, Правдин, Милон.

Слово учителя

Стародум – герой-резонер.

Резонер – персонаж литературы эпохи классицизма (особенно комедий). Не принимающий активного участия в развитии действия, но призванный увещевать или обличать других героев, высказывая нравоучительные – с точки зрения автора – суждения.

— Когда появляется Стародум в комедии?

В комедии Стародум появляется в Д.3 явл.1, когда конфликт уже обозначен и окружение Простаковой выявило себя.

— В чем заключается роль героя?

— Чтобы лучше понять этого героя, его взгляды на общество и жизненные принципы, я предлагаю вам провести небольшую исследовательскую работу. Для этого нам необходимо заполнить таблицу.

Исследовательская работа с текстом. (работа в парах. Таблица у каждого на парте.)

Работа с таблицей

План	Примеры
Родословная Стародума	«Отец мой у двора Петра Великого…»
Воспитание Стародума	«Отец мой непрестанно мне твердил одно и то же: имей сердце, имей душу, и будешь человек во всякое время»
На военной службе. Отставка	«Многие случаи имел я отличить себя. Раны мои доказывают, что я их и не пропускал. Доброе мнение обо мне начальников и войска было лестною наградою службы моей, как вдруг получил я известие, что граф, прежний мой знакомец, о котором я гнушался вспоминать, произведен чином, а обойден я, я, лежавший тогда от ран в тяжкой болезни. Такое неправосудно растерзало мое сердце, и я тотчас взял отставку»
Рассуждения о	современной жизни
О подлинной знатности	«Одно почтение должно быть лестно человеку — душевное; а душевного почтения достоин только тот, кто в чинах не по деньгам, а в знати не по чинам»
О воспитании молодого дворянина	«Чтоб в достойных людях не было недостатку, прилагается ныне особливое старание о воспитании. .. Оно должно быть залогом благосостояния государства»
О добродетели и благонравии как нравственных основах личности	«Прямое достоинство в человеке есть душа… Главная цель всех знаний человеческих – благонравие…Без благонравия никто не сможет выйти в люди»
О крепостном праве	«Угнетать рабством себе подобных — беззаконно»

— Нужны ли государству такие люди, как Стародум?

Сообщение о Милоне и Правдине.

Милон развивает идеи просвещения и «добродетели» применительно к военной области. Для него важны не столько личная слава,сколько слава отечества.

Правдин появляется в доме Простаковых как чиновник, имеющий повеление «объехать здешний округ». Предназначение Правдина – не просто осудить порок с высоты представлений о долге дворянина, но наказать его силой данной ему власти.

Итоги урока

Комедия «Недоросль» — произведение русского классицизма. тем не менее она уже находится у истоков русской реалистической литературы. Великая заслуга Фонвизина в том, что он, ограниченный рамками классицистических правил и условностей, сумел разрушить многие из них, (и подробно об этом мы поговорим на следующем уроке), создал произведение глубоко новаторское как по содержанию, так и по своей художественной форме. Завершая наш разговор, попробуем ответить ещё на несколько вопросов:

— Какие идеи и проблемы находят отражение в комедии?

Это идеи самого автора. Каким должен быть истинный дворянин — и отвечает ли русское дворянство своему назначению? Необходимость просвещения, образования — отсутствие их. Бесправие крестьян и произвол помещиков. Правильное воспитание граждан – залог благополучия государства.

— Как вы думаете, для нашего времени, очень непростого, проникнутого жаждой денег, власти, жизнеспособными ли оказываются столь дорогие Фонвизину идеи?

— Устарели ли сегодня идеи гражданственности, служение Отечеству, столь любимые классицистами?

Д. з.

1.Заполнить таблицу

2.Найти в комедии признаки классицизма и несоответствие им.

Экологические стрессы перед ростом влияют на патогены пищевого происхождения Реакция на последующую химическую обработку

1. Карстенс К.С., Салазар Дж.К., Даркох С. Вспышки болезней пищевого происхождения в Соединенных Штатах, связанные со свежими продуктами, с 2010 по 2017 год. микробиол. 2019;10:2667. doi: 10.3389/fmicb.2019.02667. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

2. Исии С., Садовски М.Дж. Escherichia coli в окружающей среде: влияние на качество воды и здоровье человека. Микробы Окружающая среда. 2008; 23:101–108. doi: 10.1264/jsme2.23.101. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

3. Фатика М.К., Шнайдер К.Р. Salmonella и продукты: выживание в растительной среде и влияние на безопасность пищевых продуктов. Вирулентность. 2011;2:573–579. doi: 10.4161/viru.2.6.17880. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Dygico L.K., Gahan C.G., Grogan H., Burgess C.M.J. Способность Listeria monocytogenes образовывать биопленку на поверхностях, соответствующих среде выращивания грибов. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 2020;317:108385. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2019.108385. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

5. Dowe M.J., Jackson E.D., Mori J.G., Bell C.R.J. Listeria monocytogenes Выживаемость в почве и заболеваемость в сельскохозяйственных почвах. Дж. Пищевая защита. 1997; 60: 1201–1207. doi: 10.4315/0362-028X-60.10.1201. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

6. Ислам М., Дойл М.П., Фатак С.С., Милнер П., Цзян X.Дж. Стойкость энтерогеморрагической Escherichia coli O157, H7 в почве и на листьях салата и петрушки, выращенных на полях, обработанных зараженным навозом компостом или поливной водой. Дж. Пищевая защита. 2004; 67: 1365–1370. doi: 10.4315/0362-028X-67.7.1365. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

7. Koutsoumanis K., Sofos J. Сравнительная реакция на кислотный стресс Listeria monocytogenes , Escherichia coli O157, H7 и Salmonella Typhimurium после привыкания к различным условиям pH. лат. заявл. микробиол. 2004; 38: 321–326. doi: 10.1111/j.1472-765X.2004.01491.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

8. Chung H., Bang W., Drake M.A. Реакция на стресс Escherichia coli . Компр. Преподобный Food Sci. Пищевая безопасность 2006; 5:52–64. doi: 10.1111/j.1541-4337.2006.00002.x. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

9. He Y., Li Y., Salazar J.K., Yang J., Tortorello M.L., Zhang W. Повышенная активность воды снижает термостойкость Salmonella enterica в арахисовом масле. заявл. Окружающая среда. микробиол. 2013;79:4763–4767. doi: 10.1128/AEM.01028-13. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

10. Brown J.L., Ross T., McMeekin T.A., Nichols P.D. Привыкание к кислоте Escherichia coli и потенциальная роль циклопропановых жирных кислот в толерантности к низкому pH. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 1997;37:163–173. doi: 10.1016/S0168-1605(97)00068-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

11. Лу Ю., Юсеф А.Е. Адаптация к сублетальным стрессам окружающей среды защищает Listeria monocytogenes от летальных факторов сохранения. заявл. Окружающая среда. микробиол. 1997; 63: 1252–1255. doi: 10.1128/aem.63.4.1252-1255.1997. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

12. Аграновский В., Ристовски З., Харгривз М., Блэколл П.Дж., Моравска Л. Оценка эффективности UVAPS: влияние физиологического возраста переносимых по воздуху бактерий и бактериальный стресс. J. Aerosol Sci. 2003; 34: 1711–1727. дои: 10.1016/S0021-8502(03)00191-5. [CrossRef] [Google Scholar]

13. Jasson V., Uyttendaele M., Rajkovic A., Debevere J. Создание процедур, провоцирующих сублетальное поражение Listeria monocytogenes , Campylobacter jejuni и Escherichia coli 1700 служить тестированию производительности метода. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 2007; 118: 241–249. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2007.07.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

14. Estilo E.E.C., Габриэль А.А. Предыдущие стрессовые воздействия влияют на последующую устойчивость к УФ-излучению 9 баллов.0005 Salmonella enterica в жидком эндосперме кокосового ореха. LWT. 2017; 86: 139–147. doi: 10.1016/j.lwt.2017.07.061. [CrossRef] [Google Scholar]

15. Himathongkham S., Riemann H. Уничтожение Salmonella typhimurium , Escherichia coli O157, H7 и Listeria monocytogenes в курином помете путем высушивания и/или газирования аммиаком. ФЭМС микробиол. лат. 1999; 171:179–182. doi: 10.1111/j.1574-6968.1999.tb13430.x. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

16. Харранд А.С., Гуарилья-Оропеза В., Скинс Дж., Кент Д., Видманн М. Природа против воспитания: оценка влияния разнообразия штаммов и условий предварительного роста на Salmonella enterica , Escherichia coli и виды Listeria Рост и выживание на выбранных продуктах. заявл. Окружающая среда. микробиол. 2021;87:e01925-20. doi: 10.1128/AEM.01925-20. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

17. Gray M.J., Wholey W.-Y., Jakob U.J. Бактериальные реакции на активные формы хлора. Анну. Преподобный Микробиолог. 2013; 67: 141–160. doi: 10.1146/annurev-micro-102912-142520. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

18. Dahl T.A., Midden W., Hartman P.E. Сравнение уничтожения грамотрицательных и грамположительных бактерий чистым синглетным кислородом. Дж. Бактериол. 1989; 171: 2188–2194. doi: 10.1128/jb.171.4.2188-2194.1989. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

19. Рэй Б. Пищевые биоконсерванты микробного происхождения. КПР Пресс; Бока-Ратон, Флорида, США: 1992. Уксусная, пропионовая и молочная кислоты бактерий закваски в качестве биоконсервантов; п. 103. [Google Академия]

20. Олмез Х., Темур С.Дж. Влияние различных дезинфицирующих средств на биопленки и прикрепление Escherichia coli и Listeria monocytogenes к зеленому листовому салату. LWT. 2010;43:964–970. doi: 10.1016/j.lwt.2010.02.005. [CrossRef] [Google Scholar]

21. К М.С., Фаврин С., Романова Н., Гриффитс М.В. заявл. Окружающая среда. микробиол. 2002; 68: 5258–5264. doi: 10.1128/AEM.68.11.5258-5264.2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

22. Bansal M., Nannapaneni R., Sharma C.S., Kiess A. Listeria monocytogenes ответ на индуцированный сублетальным хлором окислительный стресс при адаптации к гомологичному и гетерологичному стрессу. Фронт. микробиол. 2018;9:2050. doi: 10.3389/fmicb.2018.02050. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

23. Park C., Beuchat L. Оценка дезинфицирующих средств для уничтожения Escherichia coli O157, H7, Salmonella и естественных микроорганизмов на дынях, медвяные дыни и спаржа. Молочная пищевая среда. Санит. 1999;15:842–847. [Google Scholar]

24. Denyer S.P., Stewart G. Механизмы действия дезинфицирующих средств. Междунар. Биодекор. биодеград. 1998; 41: 261–268. doi: 10.1016/S0964-8305(98)00023-7. [CrossRef] [Google Scholar]

25. Харранд А.С., Ковач Дж., Кэрролл Л.М., Гуарилья-Оропеза В., Кент Д.Дж., Видманн М. Сборка и характеристика коллекции штаммов патогенов для обеспечения безопасности продукции: условия до выращивания оказывают большее влияние на толерантность к пероксиуксусной кислоте, чем разнообразие штаммов. Фронт. микробиол. 2019;10:1223. doi: 10.3389/fmicb.2019.01223. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

26. Beier R. Взаимодействие и ингибирование патогенных бактерий пищевого происхождения с отдельными видами диссоциированных органических кислот: обзор. J. Food Chem. нанотехнологии. 2021; 7: 4–17. doi: 10.17756/jfcn.2021-0106. [CrossRef] [Google Scholar]

27. Бут И.Р., Кролл Р.Г., Гулд Г.В. Механизм действия процедур консервирования пищевых продуктов. Elsevier Science Publishers Ltd.; Лондон, Великобритания: 1989. Сохранение пищевых продуктов при низком pH; стр. 119–160. [Google Scholar]

28. Сагон Х.-Г., Ли С.-Ю., Чанг П.-С., Хеу С., Рю С., Чой Ю.-Дж. , Канг Д.-Х. Комбинированное воздействие ультразвука и органических кислот на снижение содержания Escherichia coli O157, H7, Salmonella Typhimurium и Listeria monocytogenes на органическом свежем салате. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 2011; 145: 287–292. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2011.01.010. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

29. Qiao Z.-H., Chen Y., Lu Z.-H., Guan L.-J., Li L. Антибактериальная и бактерицидная активность молочной кислоты против три штамма пищевых патогенных бактерий. Фронт. Клетка. Заразить. микробиол. 2008; 10: 187–190. [Google Scholar]

30. Borges A., Ferreira C., Saavedra M.J., Simões M. Антибактериальная активность и механизм действия феруловой и галловой кислот против патогенных бактерий. микроб. Сопротивление наркотикам. 2013; 19: 256–265. doi: 10.1089/mdr.2012.0244. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

31. Chang J.-M., Fang T.J. Выживаемость сероваров Escherichia coli O157, H7 и Salmonella enterica Typhimurium в салате айсберг и антимикробный эффект рисового уксуса против Кишечная палочка O157, H7. Пищевой микробиол. 2007; 24: 745–751. doi: 10.1016/j.fm.2007.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Инактивация стрессированных клеток Escherichia coli O157, H7 на поверхности листьев рукколы хлором и пероксиуксусной кислотой. Дж. Пищевая защита. 2014;77:32–39. doi: 10.4315/0362-028X.JFP-13-019. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

33. Wang C., Chang T., Yang H., Cui M. Антибактериальный механизм действия молочной кислоты на физиологические и морфологические свойства Salmonella Enteritidis , Escherichia coli и Listeria monocytogenes . Пищевой контроль. 2015;47:231–236. doi: 10.1016/j.foodcont.2014.06.034. [CrossRef] [Google Scholar]

34. Акбас М., Олмез Х. Инактивация Escherichia coli и Listeria monocytogenes на салате айсберг путем промывки погружением в органические кислоты. лат. заявл. микробиол. 2007; 44: 619–624. doi: 10.1111/j.1472-765X.2007.02127.x. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

35. Бан Г.-Х., Пак С.-Х., Ким С.-О., Рю С., Канг Д.-Х. Синергический эффект пара и молочной кислоты против биопленок Escherichia coli O157, H7, Salmonella Typhimurium и Listeria monocytogenes на поливинилхлориде и нержавеющей стали. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 2012; 157: 218–223. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2012.05.006. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

36. Браширс М., Амескита А., Стрэттон Дж. Валидация методов, используемых для восстановления Escherichia coli O157, H7 и Salmonella spp. подвергается стрессовым состояниям. Дж. Пищевая защита. 2001; 64: 1466–1471. doi: 10.4315/0362-028X-64.10.1466. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

37. Noriega E., Velliou E., van Derlinden E., Mertens L., van Impe J.F. Влияние иммобилизации клеток на теплоиндуцированное сублетальное повреждение Escherichia coli , Salmonella Typhimurium и Listeria innocua . Пищевой микробиол. 2013; 36: 355–364. doi: 10.1016/j.fm.2013.06.015. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

38. Финн С., Конделл О., МакКлюр П., Амескита А., Фаннинг С.Дж. Механизмы выживания, реакции и источники Salmonella в условиях низкой влажности. Фронт. микробиол. 2013;4:331. doi: 10.3389/fmicb.2013.00331. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

39. Груздев Н., Пинто Р., Села С.Дж. Стойкость Salmonella enterica при обезвоживании и последующем хранении в холодильнике. Пищевой микробиол. 2012;32:415–422. doi: 10.1016/j.fm.2012.08.003. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

40. Maserati A., Fink R.C., Lourenco A., Julius ML, Diez-Gonzalez F. Общая реакция Salmonella enterica serovar Typhimurium на высыхание: новая роль факторов вирулентности sopD и sseD в выживании. ПЛОС ОДИН. 2017;12:e0187692. doi: 10.1371/journal.pone.0187692. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

41. Коджаман Н., Саримехметоглу Б. Стрессовые реакции Listeria monocytogenes . Анкара унив. Вет Фак. Дерг. 2016; 63: 421–427. [Академия Google]

Стойкость Salmonella Typhimurium LT2 в почве после роста в среде для салата

Введение

Бактериальные патогены человека (HPs) на свежих продуктах представляют потенциальную угрозу для здоровья человека. Salmonella enterica относится к числу наиболее частых бактериальных НР и может вызывать опасные для жизни диарейные заболевания. Поскольку специфическая деконтаминация S. enterica из фруктов и овощей практически невозможна, следует избегать или уменьшать контаминацию. К сожалению, загрязнение продуктов S. enterica может встречаться на протяжении всей производственной цепочки, и одним из возможных источников является почва (Guo et al., 2002; Klerks et al., 2007; Barak et al., 2011; Kroupitski et al., 2011; Olaimat и Холли, 2012). Появление S. enterica в почве может быть связано с поливной или паводковой водой, органическими удобрениями, фекалиями или растительными остатками, заделываемыми в почву после сбора урожая (Semenov et al. , 2010; Jacobsen and Bech, 2012; Olaimat and Holley, 2012). После внесения в почву S. enterica может сохраняться в течение нескольких месяцев (Данилюк и др., 2008; Бреннан и др., 2014). На его выживание в почве влияет множество биотических и абиотических факторов. Общие утверждения о влиянии одного фактора затруднительны, поскольку различные исследования часто приводили к противоречивым выводам, вероятно, из-за сложных взаимодействий между влияющими факторами, различий в экспериментальных установках, штаммах или методах обнаружения и количественного определения. Среди прочего, преадаптация до их интродукции в почвенную среду может иметь важное значение для судьбы S. enterica в почве. Например, Семенов и др. (2010) наблюдали улучшенную выживаемость S. enterica серовара Typhimurium ( S . Typhimurium) в навозе после прохождения клеток через пищеварительный тракт коров. Точно так же после воздействия сублетальных кислых условий S. Typhimurium показали улучшенную выживаемость в последующих чрезвычайно кислых условиях (Lee et al. , 1995). Кроме того, Shah et al. (2013) обнаружили, что предварительная адаптация S. Typhimurium к холоду привела к увеличению выживаемости в кислых условиях. Установлено, что преадаптация к арахисовому маслу или кратковременному сублетальному тепловому стрессу повышает термостойкость на S. enterica серотипов Typhimurium, Enteritidis, Tennessee, Thompson и Hartford (Fong and Wang, 2016b) и Leyer and Johnson (1992) наблюдали повышенную выживаемость штамма S. Typhimurium LT2 в сыре после адаптации к кислотному стрессу. Эффект преадаптации также называют перекрестной защитой, термин, который обычно используется в исследованиях, связанных с пищевой промышленностью. Согласно обзору Andino and Hanning (2015), воздействие стресса, вызванного высыханием, может привести к перекрестной толерантности к S. enterica серотипов Typhimurium, Enteritidis, Newport и Infantis к другим стрессам, таким как тепловые дезинфицирующие средства и ультрафиолетовое излучение.

Хотя эти результаты указывают на важную роль преадаптации для выживания бактериальных НР, в большинстве опубликованных исследований мало внимания уделяется условиям выращивания инокулята. Часто инокулят предварительно выращивают на богатой среде, такой как бульон Лурия Бертани (LB).

Цель этого исследования состояла в том, чтобы проанализировать, является ли предварительный рост модельного штамма S. enterica серовар Typhimurium, штамм LT2, на недавно разработанной среде для салата (LM) улучшает его выживаемость в почве по сравнению с предварительным ростом в LB. LM был разработан, потому что наша долгосрочная цель состоит в том, чтобы понять факторы, влияющие на способность Salmonella колонизировать фитосферу. Кроме того, среда, содержащая растительный материал, имитирует инкубацию Salmonella в растительных остатках, которые остаются на поле после сбора урожая и заделываются в почву перед посевом следующей культуры. Выживаемость LT2, предварительно выращенного в LM или LB, изучали в почвенных микрокосмах. Судьбу LT2 контролировали путем подсчета на чашках и количественной ПЦР. В дополнительном эксперименте приживаемость в почве LT2, С . Штамм Typhimurium 14028s и S. enterica серовара Senftenberg, предварительно выращенные либо в LM, либо в LB, отслеживали только путем подсчета на чашках. Зная, что образование биопленки приводит к повышению выживаемости при высыхании и желудочном стрессе (Aviles et al., 2013) и повышению устойчивости в среде производства продуктов питания (Vestby et al., 2009), было высказано предположение, что образование биопленки может повысить выживаемость HP на растениях (Aviles et al., 2013). Yaron and Römling, 2014), мы предположили, что образование биопленки может влиять на выживаемость Сальмонелла в почве. Чтобы проверить, может ли LM влиять на способность к образованию биопленки, набор сероваров S. enterica был проанализирован с использованием анализов биопленки in vitro на клетках, выращенных в бульоне LM или LB.

Материалы и методы

бактериальных штаммов

Salmonella enterica Serovar Typhimurium Lt2 DSM 18522 был получен от DSMZ (Braunschweig, Germany) и S. ener-v.ly-ver-ver-ver-ver-ver-ver-ilvimer-il. Тур, Франция). S. enterica серовары Senftenberg, Brunei и Muenster (Elviss et al., 2009) были любезно предоставлены доктором Николой Холден (Институт Джеймса Хаттона, Данди, Шотландия, Великобритания) и профессором Джоном Койя (Шотландский справочный центр по Salmonella, Глазго, Шотландия, Великобритания). Спонтанно устойчивые к рифампицину мутанты выделяли инокуляцией ночной культуры на чашки с агаром LB, содержащим рифампицин (50 мг/л). Устойчивые колонии высевали на агар LB с рифампицином для подтверждения устойчивости.

Среда для салата

Для приготовления стерильного экстракта салата примерно 500 г листьев салата ( Lactuca sativa L. сорта Tizian) измельчали в блендере со 150 мл dH ₂ O до гомогенизации растительного материала. Этот гомогенат фильтровали через фильтровальную бумагу (MN 615, Macherey-Nagel GmbH & Co. KG, Дюрен, Германия) для удаления более крупных частиц и центрифугировали при 10000 г в течение 30 мин при 4°С. Супернатант стерильно фильтровали через мембранные фильтры 0,22 мкм (Sterivex, Merck KGaA, Дармштадт, Германия). LM состоит из 25% (по объему) свежего экстракта салата-латука, 20% M9.соли (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Мюнхен, Германия; 5-кратное концентрирование для получения конечной концентрации, указанной производителем) и 55% стерильной деионизированной воды. Для приготовления LM-планшетов добавляли 5% стерильной деионизированной воды вместо 55% и 50% 2-кратного концентрированного водного агара.

Микрокосмические эксперименты

Первый микрокосмический эксперимент был проведен для анализа выживания S. Typhimurium LT2 в почве. Использовалась песчаная почва из Гросберена (52°33′ с.ш., 13°22′ в.д., Германия). Он был охарактеризован как Arenic-Luvisol (Rühlmann and Ruppel, 2005), с меньшим количеством илистого песка и 5,5% глины [делювиальный песок (DS)], который был просеян (2 мм) и доведен до 50% его максимальной водоудерживающей способности, что привело к конечное содержание воды 112 мл на кг почвы (Schreiter et al. , 2014).

LT2 выращивали в течение ночи при 37°C в бульоне LB (Carl Roth GmbH + Co. KG, Карлсруэ, Германия) с добавлением рифампицина (50 мг/л). 250 мкл этой культуры переносили в 250 мл LM или LB соответственно. Культуры выращивали в течение ночи в течение 18–20 ч при 37°С. Стационарные клетки осаждали на низкой скорости, чтобы избежать стресса клеток (1500 г , 10 мин) и дважды промывали 0,85% (масса/объем) раствором NaCl. Инокуляцию почвы проводили путем смешивания почвы DS с бактериальными растворами до конечной концентрации 10 ⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на г сухой почвы. Инокулированную почву помещали в цветочные горшки из полистирола (диаметр 11 см, высота 9 см) по 600 г почвы на горшок, и горшки накрывали для уменьшения испарения воды.

Эксперимент проводился с тремя различными обработками: (i) почва DS с LT2, предварительно выращенная в LB с рифампицином (50 мг/л), (ii) почва DS с LT2, предварительно выращенная в LM с рифампицином (50 мг/л) и ( iii) почва DS без инокулята в качестве контроля. Каждая обработка была представлена четырьмя повторностями. Микрокосмы инкубировали в течение 35 дней при 20°C, и содержание воды поддерживали постоянным на уровне 50% от максимальной водоудерживающей способности, контролируя массу и добавляя воду при необходимости. Образцы почвы брали через 0, 4, 7, 10, 14, 21, 28 и 35 дней после инокуляции (dpi). Перед отбором проб почву в каждом горшке тщательно перемешивали.

Второй микрокосмический эксперимент был проведен для сравнения выживаемости LT2 в почве с выживаемостью S. Typhimurium штамма 14028s и S. enterica серовара Senftenberg. В этом эксперименте каждый штамм предварительно выращивали на чашках с агаром LM и LB с добавлением рифампицина (50 мг/л). Планшеты инкубировали в течение ночи в течение 18–20 ч при 28°С. Бактериальные клетки осаждали (1500 г , 10 мин) и промывали 10 мМ раствором MgCl ₂. Инокуляцию почвы проводили путем смешивания почвы DS с бактериальными растворами до конечной концентрации 10 ⁶ КОЕ на г сухой почвы. Инокулированную почву помещали в конические пробирки объемом 50 мл по 50 г на пробирку, и пробирки закрывали для предотвращения испарения воды. Эксперимент проводился с тремя различными обработками для каждого штамма Salmonella : (i) почва DS с Salmonella , предварительно выращенная на LB с рифампицином (50 мг/л), (ii) почва DS с Salmonella , предварительно выращенная на LM с рифампицином. (50 мг/л) и (iii) почва DS без инокулята в качестве контроля. Каждая обработка была представлена четырьмя повторностями. Микрокосмы инкубировали в течение 42 дней при 20°С. Пробы почвы отбирали через 0, 4, 7, 10, 14, 21, 28, 35 и 42 dpi. Перед отбором проб почву в каждой пробирке тщательно перемешивали. Эксперимент проводили в трех независимых повторах.

Количественное определение

Salmonella с помощью чашечного подсчета и количественное определение S. Typhimurium LT2 с помощью количественной ПЦР в реальном времени (кПЦР) помещали на агар R2A (Merck KGaA, Дармштадт, Германия) с добавлением рифампицина (50 мг/л) и циклогексимида (100 мг/л) в первом эксперименте с микрокосмом или на агар XLD (Carl Roth GmbH + Co. KG, Карлсруэ, Германия) с рифампицином (50 мг/л) во втором микрокосмическом эксперименте и подсчитывали колонии после инкубации при 37°С в течение 24 часов.
В первом эксперименте с микрокосмом общая ДНК сообщества была извлечена из 0,5 г почвы взятых образцов почвы с использованием набора FastDNA SPIN для почвы (MP Biomedicals, Heidelberg, Germany) и очищена с помощью набора GENECLEAN SPIN Kit (MP Biomedicals, Heidelberg, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Для количественного определения S. Typhimurium LT2 в общей ДНК сообщества ген STM4497, специфичный для S. enterica Typhimurium, был количественно определен с использованием количественной ПЦР. Количественную оценку на основе qPCR проводили через 0, 7, 14, 21 и 28 dpi в первом повторении эксперимента. S. Typhimurium LT2 количественно определяли с помощью количественной ПЦР с использованием фрагмента LT2, клонированного в вектор pGEM-T (Promega, Мангейм, Германия), серию разведений в качестве стандарта. ДНК-мишень S. Typhimurium амплифицировали в 50 мкл реакционной смеси, содержащей 5 мкл разведенной 1:5 ДНК, выделенной из образца, 1,25 ЕД ДНК-полимеразы TrueStart Taq (Fermentas, St. Leon-Rot, Германия), буфер TrueStart, 0,2 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата, 2,5 мМ MgCl ₂ , 0,1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (Fermentas), 5% ДМСО и 0,3 мкМ прямого праймера LT2-F (GTCAAATAACCCACGTTCA), обратного праймера LT2-R (TCTCAAAAACAACGGCTC) и TaqMan зонд LT2-PR (FAM-TCGCGCACCTCAACATCT-TAMRA). S. Typhimurium-специфические праймеры, амплифицирующие фрагмент гена STM4497 размером 187 п.н., который специфичен для S. Typhimurium (Kim et al., 2006), были разработаны в этом исследовании с использованием CLC Main Workbench 7 (CLC bio, Орхус, Дания). Реакции проводили в течение 10 мин при 95°С и 40 циклов по 15 с при 95°С, 15 с при 58,3°С и 60 с при 60°С в системе CFX96 (Bio-Rad, Мюнхен, Германия).
Для сравнения выживаемости в почве Salmonella , предварительно выращенных в LM или LB, наклоны линейных регрессий логарифмически трансформированных КОЕ и результатов количественной ПЦР рассчитывали для каждой повторности. Результаты сравнивались по шкале Стьюдента t -критерий и различия считались значительными, когда значения p были ниже 0,05 (дополнительная таблица S1).
In Vitro Анализ биопленки
Анализ биопленки проводили, как описано Stepanovic et al. (2007). Для получения клеток в 5 мл бульона LB инокулировали 3–4 колонии и инкубировали в течение 18 ч при 37°С. После инкубации культуру в стационарной фазе осторожно встряхивали для разрушения кластеров клеток и доводили до OD ₆₀₀ _нм = 1 с бульоном LB, что соответствует примерно 10 ⁸ КОЕ на мл. Этот инокулят разводили 1:100 в бульоне LM или LB для культивирования биопленки. 96-луночные титрационные микропланшеты, содержащие 200 мкл инокулированной среды для культивирования биопленок (LB или LM, инокулированные в конечной концентрации 10 ⁶ КОЕ/мл), инкубировали в аэробных условиях при 37°C в течение 24 часов. После промывки и фиксации клетки окрашивали 0,41% кристаллическим фиолетовым. Избыток красителя удаляли промывкой водопроводной водой, краситель, связанный с клетками, растворяли в 95% этанола и ОП ₅₇₀ _нм измерены. Среднее значение ОП отрицательных контролей вычитали из значений всех образцов. Анализ повторяли четыре раза, по восемь повторов на каждый тестируемый штамм и среду. Значения ОП роста в LB или LM сравнивали для каждого штамма с использованием теста Стьюдента t .
Результаты
Предварительный рост в среде для салата (LM) Увеличение выживаемости
S. Typhimurium LT2 в почве
Мониторинг выживаемости LT2 в первом эксперименте с почвенным микрокосмом показал, что число КОЕ культивируемых клеток LT2, предварительно выращенных в LB, уменьшалось быстрее чем для тех, кто предварительно выращен в LM. Количество КОЕ LT2 определяли количественно на селективных планшетах до 28 и 35 dpi для инокулята из LB и LM соответственно (рис. 1). За это время численность культивируемых ЛТ2 снизилась с исходных 10 ⁷ КОЕ/г сухой почвы до примерно 10 ⁴ КОЕ/г сухой почвы через 4 недели для клеток, предварительно выращенных в LB, и через 5 недель для клеток, предварительно выращенных в LM. LT2, предварительно выращенный в LM, сохранялся на значительно более высоком уровне в почве по сравнению с LT2, предварительно выращенным в LB. Количество КОЕ клеток из LM значительно уменьшилось ( p < 0,05; дополнительная таблица S1) медленнее по сравнению с LT2 из LB.

РИСУНОК 1. Количество колониеобразующих единиц (КОЕ) в делювиальном песке (DS) на грамм почвы (сухой вес) Salmonella enterica серовар Typhimurium штамм LT2, предварительно выращенный в бульоне Лурия Бертани (LB) или среде салата (LM). Пробы почвы отбирали через 0, 4, 7, 10, 14, 21, 28 и 35 дней после инокуляции (dpi). Линии соответствуют линейным регрессиям, представляющим данные для визуализации различий, наблюдаемых между предварительным ростом в LM и LB. Столбики погрешностей указывают на стандартные отклонения четырех повторов. Наклоны и коэффициенты определения линейных регрессий приведены в дополнительной таблице S1.
Результаты подсчета КОЕ были подтверждены независимым от культивирования анализом на основе количественной ПЦР (рис. 2). Клетки LT2 в почве определяли количественно с помощью количественной ПЦР до 28 dpi. Число копий гена-мишени уменьшилось примерно с 10
7 копий гена на грамм сухой почвы в начале эксперимента до примерно 10 ⁴ копий гена на грамм сухой почвы через 4 недели. Количество копий гена при лечении LT2 из LM значительно снижалось ( p <0,05; дополнительная таблица S1) медленнее по сравнению с лечением LT2 из LB.
РИСУНОК 2. Количественную оценку гена STM4497, специфичного для S. enterica серовара Typhimurium, с помощью количественной ПЦР проводили через 0, 7, 14, 21 и 28 dpi. 90 364 Линии соответствуют линейным регрессиям, представляющим данные для визуализации различий, наблюдаемых между LT2, предварительно выращенным в LM, и LT2, предварительно выращенным в LB. Наклоны и коэффициенты определения линейных регрессий приведены в дополнительной таблице S1. 95% доверительные интервалы обозначены серыми линиями.
Во втором эксперименте с почвенным микрокосмом выживаемость LT2 сравнивалась с выживаемостью
S . Typhimurium штамм 14028s и S . Senftenberg, каждый предварительно выращен на LM или LB. Количество КОЕ поддавалось количественному измерению до 42 dpi, и оно уменьшилось с исходных 10 ⁷ КОЕ/г сухой почвы до приблизительно 10 ⁴ КОЕ/г сухой почвы через 6 недель (рис. 3). Результаты первого эксперимента с микрокосмом были подтверждены для LT2 во втором эксперименте с микрокосмом, поскольку LT2, предварительно выращенный в LM, снова сохранялся в почве в значительно больших количествах по сравнению с LT2, предварительно выращенным в LB. Для С . Typhimurium 14028s и S . Senftenberg, не было обнаружено существенных различий между инокулятом от LB и LM (дополнительная таблица S1). Эксперимент с почвенным микрокосмом был проведен трижды, что подтвердило значительно более низкую выживаемость LT2 из LB по сравнению с LT2 из LM в повторах, а также результаты для
S . Typhimurium 14028s и S . Зенфтенберг (дополнительный рисунок S1).
РИСУНОК 3. Количество колониеобразующих единиц в DS на грамм почвы (сухой вес) S. enterica серовар Typhimurium штаммы LT2 и 14028s, а также S. enterica серовар Senftenberg, инокулированные из бульона Luria Bertani (LB) (A) и LM 1 (6) 9. Пробы почвы отбирали через 0, 4, 7, 10, 14, 21, 28, 35, 42, 49 и 56 точек на дюйм. Линии соответствуют линейным регрессиям, представляющим данные для визуализации различий, наблюдаемых для штаммов. Столбики погрешностей указывают на стандартные отклонения четырех повторов. Наклоны и коэффициенты определения линейных регрессий приведены в дополнительной таблице S1.

Рост лейкоцитов влияет на образование биопленки
Чтобы проверить гипотезу о том, что рост лейкоцитов влияет на способность штаммов S. enterica образовывать биопленки, мы проанализировали образование биопленок LT2, S. Typhimurium 14028s и . С . enterica Senftenberg и сравнили его с образованием биопленки S . enterica сероваров Muenster и Brunei в анализе in vitro с использованием 96-луночных планшетов для микротитрования. Образование биопленки у LT2, выращенного в LB, было сильнее, чем у LT2, выращенного в LM (рис. 4). Степень образования биопленки LT2 была сопоставима с S. enterica серовара Muenster, образование биопленки S. Typhimurium 14028s было сравнимо с S. enterica серовара Brunei и слабее, чем образование биопленки LT2 и S. Muenster (рис. 4). LM, по-видимому, влиял на образование биопленок в случае штаммов LT2,
S. Typhimurium 14028s, S. Muenster и S. Brunei. Единственным исключением был S . Senftenberg, которые образовывали чрезвычайно обширные биопленки при выращивании в LM (рис. 4), хотя образование биопленок в LB было сравнимо с таковым в LT2 или 9.0191 С. Мюнстер.
Рисунок 4. in vitro Анализ биопленки S. Enterica Serovar Typhimurium Strams Lt2, 14028S и 1. SEFIMURIURIURIURIURIURIURE LT2, 14028S и 1 SEPHIMURIURIURIURE LT2, 14028S и 1. OD ₅₇₀ _нм Значения, соответствующие образованию биопленки в бульоне Лурия Бертани (LB), обозначены темными столбиками, а значения для LM — светлыми столбиками. Среднее значение ОП отрицательных контролей вычитали из значений всех образцов. Столбики погрешностей указывают на стандартные отклонения 32 повторений (четыре независимых повторения анализа с восемью повторениями в каждом). Значимые различия между обработками каждого штамма отмечены звездочкой (оценка Стьюдента 9).0191 t

— тест, p < 0,05).
Обсуждение
Экология Salmonella в почве до сих пор в значительной степени неизвестна. Чтобы лучше понять устойчивость этих бактерий в окружающей среде, необходим анализ факторов, влияющих на их выживание. Эксперименты с микрокосмом являются хорошими модельными системами для изучения выживания Salmonella в почве в определенных лабораторных или тепличных условиях. Было показано, что на судьбу 9 влияют различные факторы, такие как температура, рН и влажность.0191 Salmonella (Сантамария и Торанзос, 2003; Якобсен и Бек, 2012). К сожалению, эксперименты, анализирующие эти факторы, даже если они проводятся в аналогичных экспериментальных условиях, часто приводят к противоположным результатам. Одним из возможных объяснений могут быть способы приготовления инокулята для этих экспериментов. Мы предположили, что условия предварительного роста влияют на выживаемость Salmonella в почве.
Поскольку нашей долгосрочной целью является понимание факторов, влияющих на устойчивость Salmonella в фитосфере, в этом отчете мы разработали и испытали новую среду, содержащую листья салата в качестве единственного источника углерода. В этой среде Salmonella не находится в идеальных условиях для роста, и клетки, скорее всего, испытывают стресс от антимикробных соединений, таких как фенольные метаболиты или перекись водорода, выделяемые растениями (Barber et al. , 2000; Wen et al., 2003; Toivonen et al. , 2012; Баррос и Сальтвейт, 2013; Онгенг и др., 2015). LM использовали для культивирования инокулята для имитации преадаптации в лабораторных условиях.
Salmonella enterica , серовар Typhimurium, штамм LT2, использовали в качестве модели для S. enterica в наших экспериментах. Влияние предварительного роста в LM на выживание LT2 в почве было проанализировано в двух независимых экспериментах с микрокосмом, демонстрирующих значительно лучшую выживаемость, когда бактерии были введены в почву после предварительного роста в LM по сравнению с соответствующими бактериями, предварительно выращенными в LB. Эти результаты свидетельствовали о преадаптационном эффекте. Стойкость в почве контролировали путем подсчета КОЕ, и результаты были подтверждены независимым методом количественной ПЦР в первом эксперименте с микрокосмом. В то время как количественное определение, зависящее от культивирования, обнаруживает только клетки, способные образовывать колонии, количественное определение клеток с помощью независимых от культивирования методов включает активные клетки, клетки, которые погибли совсем недавно, и клетки, которые вошли в жизнеспособное, но не культивируемое состояние, в котором они не образуют колоний в обычном режиме. использовали твердые питательные среды (Oliver, 2010). Следовательно, числа, полученные с помощью количественного определения qPCR, были примерно на один порядок выше, чем количество КОЕ.
Предполагалось, что преадаптация к стрессовым условиям повышает выживаемость за счет индукции признаков, связанных со стрессоустойчивостью, и что этот механизм помогает Salmonella справляться со стрессами окружающей среды (Lee et al., 1995; Semenov et al., 2010; Шах и др., 2013). Общая устойчивость к стрессу зависит от регулятора транскрипции RpoS и соответствующей экспрессии нижестоящих генов. RpoS накапливается в клетках в стационарной фазе или в клетках, страдающих от голодания или других стрессов (Battesti et al., 2011). S. Typhimurium LT2 не способен вызывать устойчивый ответ кислотоустойчивости (Lee et al., 1995), поскольку ген, кодирующий RpoS, начинается с редкого кодона TTG (Wilmes-Riesenberg et al., 1997), что приводит к низкому Уровень РПОС. Однако Шах и соавт. (2013) предположили, что у S. Typhimurium LT2 требование RpoS для индукции реакции на кислоту можно обойти за счет предварительной адаптации к холодовому стрессу. Авторы показали, что преадаптация S. Typhimurium LT2 к холодовому стрессу приводит к индукции генов, связанных с реакцией на стресс и путями репарации. Сходные гены индуцируются в RpoS-зависимых ответах на кислотный стресс, например, у Escherichia coli (Battesti et al., 2011). Принцип, согласно которому преадаптация к данному стрессу приводит к повышению выживаемости при других стрессах, может быть справедлив и для других штаммов Salmonella или других НР в целом. Однако, поскольку подробные механизмы неизвестны, это явление может зависеть от регуляторов, отличных от RpoS (Shah et al., 2013). Последствия различных стрессов также были проанализированы с точки зрения возможности инфицирования человека. Воздействие холодового стресса, например, привело к повышенной адгезии и инвазивности S. Typhimurium в отношении культивируемых клеток кишечного эпителия (Caco-2) (Shah et al. , 2014), а адаптация к умеренному кислотному стрессу защищает от более кислых условий, встречающихся в кишечнике человека, и других стрессов (Greenacre и Броклхерст, 2006). Поэтому анализ преадаптации важен не только с точки зрения ее влияния на устойчивость в окружающей среде, но и потому, что он может представлять повышенный риск заражения человека.
Чтобы проверить, можно ли наблюдать влияние LM-предварительного роста на выживаемость в почве для других Salmonella , мы включили штамм S. Typhimurium 14028s и еще один серовар S. Senftenberg в микрокосмический эксперимент. Удивительно, но мы не смогли наблюдать улучшенную выживаемость этих штаммов в почве. Эти результаты свидетельствуют о высокой штаммоспецифичности ЛМ-преадаптации. Ранее сообщалось о характерном для штамма или серотипа поведении Salmonella в отношении, например, выживания в сельскохозяйственной или пищевой среде. Андино и др. (2014) продемонстрировали выживаемость в зависимости от штамма в корме для птицы, а Fong and Wang (2016a) продемонстрировали лучшую выживаемость S. Hartford с арахисовым маслом, скорлупой арахиса и семенами чиа по сравнению с S. Typhimurium. Анализируя стойкость Salmonella в порошке сывороточного белка, Farakos et al. (2014) обнаружили, что S . Теннесси и S . Агона выжила лучше, чем S . Монтевидео и тот S . Typhimurium показал наименьшую устойчивость. Эти различия между сероваров следует принимать во внимание при сравнении результатов исследований, в которых использовались разные штаммы и условия предварительного роста, чтобы делать прогнозы для оценки риска. Кроме того, результаты, полученные в этом исследовании для песчаной почвы, могут быть неприменимы к другим типам почв, отличающимся по своим физико-химическим и биологическим характеристикам.
Механизмы, лежащие в основе специфичного для серовара или штамма поведения в отношении преадаптации, до сих пор неясны, поскольку механизмы, участвующие в преадаптации, вероятно, очень сложны и еще не изучены. Возможно, наблюдаемый в этом исследовании преадаптационный эффект обусловлен измененной физиологией преадаптированных клеток. Штаммы Salmonella , проанализированные в этом исследовании, были только что отправлены на секвенирование, поскольку сравнение их геномов может показать различия, которые могут способствовать различному поведению штаммов, наблюдаемых в этом исследовании. Несколько исследований показали, что образование биопленки повышает устойчивость Salmonella в различных средах (Vestby et al., 2009; Aviles et al., 2013; Patel et al., 2013; Yaron and Römling, 2014; Bridier et al., 2015). Поэтому мы предположили, что рост LM влияет на способность LT2 образовывать биопленки. Однако наши результаты показали более обширное образование биопленки клетками S. Typhimurium LT2, выращенными в LB, по сравнению с клетками, выращенными в LM. Образование биопленки LT2 в LM и LB также сравнивали с образованием биопленки S. Typhimurium 14028s и С . enterica серовары Зенфтенберг, Мюнстер и Бруней. Среди испытанных в этом исследовании штаммов и сероваров только S . Зенфтенберг образовывал исключительно обширные биопленки при выращивании в LM. S . Серовар Зенфтенберга, использованный в этом исследовании, был первоначально выделен из растений базилика, причастных к вспышке, связанной с продуктами, в Великобритании (Pezzoli et al., 2007, 2008). Ранее сообщалось о повышенной способности образовывать биопленки у штаммов, выделенных из продуктов (Patel et al., 2013), а также о серовар- и штаммоспецифических различиях в прикреплении, например, к листьям растений (Berger et al., 2009).; Патель и Шарма, 2010 г.; Ярон и Рёмлинг, 2014). Детальные механизмы и факторы, ответственные за наблюдаемые различия, пока неясны. Процесс прикрепления к поверхностям и формирования биопленки является сложным, в него вовлечено множество факторов, и бактерии используют несколько параллельных механизмов, позволяющих прикрепляться к различным поверхностям в различных условиях (Schikora et al., 2011; Yaron and Römling, 2014).
Заключение
Это исследование показало, что предварительный рост недавно разработанной лейомиомы привел к лучшей выживаемости S. Typhimurium LT2 в почве, в отличие от S. Typhimurium 14028s и S. Senftenberg. Эти результаты показывают, что преадаптация может быть важным фактором, определяющим выживание Salmonella в проанализированной здесь песчаной почве, и ее следует учитывать в дальнейших экспериментах, анализирующих судьбу Salmonella в окружающей среде. Интересно, что LM по-разному влиял на формирование биопленки протестированных сероваров Salmonella . Особенно примечательной была сильно повышенная способность S. Senftenberg для формирования биопленок при выращивании в LM по сравнению с LB. Напротив, образование биопленки с помощью S . Typhimurium LT2 снижался в биоанализах по мере роста лейомиомы, что может свидетельствовать о том, что улучшенная выживаемость LT2 после преадаптации лейомиомы, вероятно, не связана с улучшением образования биопленки.
Это исследование продемонстрировало ограниченность результатов, полученных в результате экспериментов с использованием лабораторных модельных штаммов, выращенных в идеальных условиях, которые не являются репрезентативными для других штаммов, поскольку наши данные ясно показали, что среда, используемая для предварительного выращивания Salmonella до инокуляции в почву и выращивание Salmonella во время анализа биопленки влияли как на способность выживать в почве, так и на способность образовывать биопленки штаммоспецифическим образом. Мы предполагаем, что эта среда может быть лучше по сравнению с другими богатыми средами, обычно используемыми для выращивания кишечных бактерий, и, таким образом, может быть рекомендована для исследований экологии кишечных HP в почве и в филлосфере.
Вклад авторов
EF, JS, RG, AS, KS: разработка исследования; EF, JS: провели эксперименты и проанализировали результаты; EF, SJ, AS, KS: написал рукопись.
Финансирование
Работа выполнена при поддержке Агентства по охране окружающей среды Германии (Umweltbundesamt; 371271209), JKI и Федерального управления сельского хозяйства и продовольствия [Bundesanstalt für Landwirtschaft und Ernährung (BLE)], гранты 13HS026 и 13HS029.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить Уте Циммерлинг и Лену Раух за их отличную техническую помощь. S. enterica серовары Senftenberg, Muenster и Brunei, используемые в этом исследовании, были любезно предоставлены Николой Холден, Институт Джеймса Хаттона, Данди, Шотландия, Великобритания, и Джоном Койя, Шотландским справочным центром по сальмонелле, Глазго, Шотландия, Великобритания. Isabelle Virlogeux-Payant, INRA Tours, Франция, любезно предоставила бактерии дикого типа 14028s. Мы благодарим Ильзу-Мари Юнгкурт за корректуру рукописи.
Дополнительный материал
Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/article/10.3389/fmicb.2017.00757/full#supplementary-material
Ссылки
Андино, А. и Ханнинг, И. (2015). Salmonella enterica : различия в выживаемости, колонизации и вирулентности среди сероваров. Науч. Мир J. 2015: 520179. doi: 10.1155/2015/520179
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Андино А., Пендлтон С., Чжан Н., Чен В. , Крицер Ф. и Ханнинг И. (2014). Выживаемость Salmonella enterica в кормах для домашней птицы зависит от штамма. Поулт. науч. 93, 441–447. doi: 10.3382/ps.2013-03401
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Авилес Б., Клотц К., Эйферт Дж., Уильямс Р. и Пондер М. (2013). Биопленки способствуют выживанию и вирулентности Salmonella enterica sv. Теннесси при длительном сухом хранении и после прохождения через систему пищеварения in vitro. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 162, 252–259. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2013.01.026
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Барак Дж. Д., Крамер Л. К. и Хао Л. Ю. (2011). Колонизация растений томата Salmonella enterica зависит от сорта, и трихомы типа 1 являются предпочтительными местами колонизации. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 77, 498–504. doi: 10.1128/AEM.01661-10
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Барбер, М. С., МакКоннелл, В.С., и ДеКо, Б.С. (2000). Противомикробные интермедиаты общего фенилпропаноидного и лигнин-специфического путей. Фитохимия. 54, 53–56. doi: 10.1016/s0031-9422(00)00038-8
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Баррос, М., и Салтвейт, М.Э. (2013). Рост микробов в свежесрезанном салате увеличивается, когда подавляется вызванное раной накопление фенолов. Послеуборочная биол. Технол. 83, 34–39. doi: 10.1016/j.postharvbio.2013.03.005
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Баттести А., Мадждалани Н. и Готтесман С. (2011). RpoS-опосредованная общая реакция на стресс у Escherichia coli . Год. Преподобный Микробиолог. 65, 189–213. doi: 10.1146/annurev-micro-0
-102946
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Бергер С. Н., Шоу Р. К., Браун Д. Дж., Мазер Х., Клэр С., Дуган Г. и др. (2009). Взаимодействие Salmonella enterica с базиликом и другими салатными листьями. ISME J. 3, 261–265. doi: 10.1038/ismej.2008.95
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Бреннан Ф. П., Мойнихан Э., Гриффитс Б. С., Хиллиер С., Оуэн Дж., Пендловски Х. и др. (2014). Влияние минерального типа глины на выживаемость бактериальных энтеропатогенов в почве. Науч. Общая окружающая среда. 46, 302–305. doi: 10.1016/j.scitotenv.2013.08.037
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Бридье А., Санчес-Визуэте П., Гильбо М., Пиар Дж. К., Найтали М. и Брианде Р. (2015). Связанная с биопленкой персистенция пищевых патогенов. Пищевой микробиол. 45, 167–178. doi: 10.1016/j.fm.2014.04.015
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Данилюк, М. Д., Нодзава-Иноуэ, М., Христова, К. Р., Скоу, К. М., Лампинен, Б., и Харрис, Л. Дж. (2008). Выживание и рост Salmonella Enteritidis PT 30 в почвах миндальных садов. J. Appl. микробиол. 104, 1391–1399. doi: 10.1111/j.1365-2672.2007.03662.x
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Элвисс, Н. К., Литтл, К. Л., Хаклсби, Л., Сагу, С., Сурман-Ли, С., де Пинна, Э., и др. (2009). Микробиологическое исследование свежей зелени из торговых помещений выявило международную вспышку сальмонеллеза. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 134, 83–88. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2009.01.015
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Фаракос, С. М., Хикс, Дж. В., Фрай, Дж. Г., и Франк, Дж. Ф. (2014). Относительная выживаемость четырех серотипов Salmonella enterica в порошке сывороточного белка с низкой активностью воды, выдержанном при 36 и 70°C при различных уровнях активности воды. J. Food Prot. 77, 1198–1200. doi: 10.4315/0362-028x.jfp-13-327
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Фонг К. и Ван С. (2016a). Штамм-специфическая выживаемость Salmonella enterica в арахисовом масле, скорлупе арахиса и семенах чиа. J. Food Prot. 79, 361–368. doi: 10.4315/0362-028x.jfp-15-419
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Фонг К. и Ван С. (2016b). Термостойкость Salmonella enterica повышается за счет предварительной адаптации к арахисовому маслу или сублетальному тепловому воздействию. Пищевой микробиол. 58, 139–147. doi: 10.1016/j.fm.2016.04.004
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Гринакр, Э. Дж., и Броклхерст, Т. Ф. (2006). Реакция толерантности к уксусной кислоте индуцирует перекрестную защиту от солевого стресса у Salmonella typhimurium . Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 112, 62–65. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2006.05.012
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Guo, X., Chen, JR, Brackett, RE, and Beuchat, LR (2002). Выживаемость Salmonella на томатах, хранящихся при высокой относительной влажности, в почве и на томатах, находящихся в контакте с почвой. Дж. Пищевая защита. 65, 274–279.
Реферат PubMed | Google Scholar
Якобсен, К.С., и Бек, Т.Б. (2012). Выживание Salmonella в почве и перенос в пресную воду и свежие продукты. Пищевой рез. Междунар. 45, 557–566. doi: 10.1016/j.foodres.2011.07.026
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ким, Х. Дж., Парк, С. Х., и Ким, Х. Ю. (2006). Сравнение Salmonella enterica серовара Typhimurium LT2 и не-LT2 Геномные последовательности Salmonella и генотипирование сальмонелл с помощью ПЦР. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 72, 6142–6151. doi: 10.1128/aem.00138-06
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Клеркс, М. М., Франц, Э., ван Гент-Пельцер, М., Зейлстра, К., и ван Брюгген, А. Х. (2007). Дифференциальное взаимодействие сероваров Salmonella enterica с сортами салата и растительно-микробные факторы, влияющие на эффективность колонизации. ISME J. 1, 620–631. doi: 10.1038/ismej.2007.82
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Крупицкий Ю., Пинто Р., Белаусов Э. и Села С. (2011). Распространение Salmonella typhimurium в листьях салата ромэн. Пищевой микробиол. 28, 990–997. doi: 10.1016/j.fm.2011.01.007
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Ли, И. С., Лин, Дж. С., Холл, Х. К., Бирсон, Б., и Фостер, Дж. В. (1995). Сигма-фактор стационарной фазы σ ^S (RpoS) необходим для устойчивого ответа на толерантность к кислоте у вирулентного Salmonella typhimurium . Мол. микробиол. 17, 155–167.
Google Scholar
Лейер Г. и Джонсон Э. (1992). Кислотная адаптация способствует выживанию Salmonella spp. в сыре. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 58, 2075–2080.
Реферат PubMed | Google Scholar
Олаймат А. Н. и Холли Р. А. (2012). Факторы, влияющие на микробную безопасность свежих продуктов: обзор. Пищевая микробиология. 32, 1–19. doi: 10.1016/j.fm.2012.04.016
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Оливер, Дж. Д. (2010). Последние данные о жизнеспособном, но не культивируемом состоянии патогенных бактерий. FEMS Microbiol. Ред. 34, 415–425. doi: 10.1111/j.1574-6976.2009.00200.x
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Онгенг Д., Герард А. Х., Спрингаэль Д., Рикебур Дж., Муянджа К. и Мауриелло Г. (2015). Судьба Escherichia coli O157:H7 и Salmonella enterica в измененной навозом почвенно-растительной экосистеме свежих овощных культур: обзор. Крит. Преподобный Микробиолог. 41, 273–294. doi: 10.3109/1040841X.2013.829415
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Патель Дж. и Шарма М. (2010). Различия в прикреплении сероваров Salmonella enterica к листьям капусты и салата. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 139, 41–47. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2010.02.005
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Патель Дж., Сингх М., Макарисин Д., Шарма М. и Шелтон Д. (2013). Различия в образовании биопленок продуктов и изолятов птицы Salmonella enterica и их стойкость на растениях шпината. Пищевой микробиол. 36, 388–394. doi: 10.1016/j.fm2013.06.019
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Пеццоли Л., Элсон Р., Литтл К., Фишер И., Йип Х., Питерс Т. и др. (2007). Международная вспышка Сальмонелла Зенфтенберг в 2007 г. евро. Наблюдение. 12:E070614.3.
Google Scholar
Pezzoli, L., Elson, R., Little, C., Yip, H., Fisher, I., Yishai, R., et al. (2008). Упаковано с Salmonella — Расследование международной вспышки инфекции Salmonella Senftenberg, связанной с заражением расфасованного базилика в 2007 году. Патог пищевого происхождения. Дис. 5, 661–668. doi: 10.1089/fpd.2008.0103
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Рюльманн, Дж., и Руппель, С. (2005). Влияние органических добавок на содержание углерода в почве и микробную биомассу — результаты долгосрочного эксперимента с коробчатой диаграммой в Гроссберене. Арх. Агрон. Почвовед. 51, 163–170.
Google Scholar
Сантамария, Дж., и Торанзос, Г. А. (2003). Кишечные патогены и почва: краткий обзор. Междунар. микробиол. 6, 5–9. doi: 10.1007/s10123-003-0096-1
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Шикора, А., Вирлоге-Паян, И., Буесо, Э., Гарсия, А.В., Нилау, Т., Шаррье, А., и другие. (2011). Сохранение механизмов заражения Salmonella у растений и животных. PLoS ONE 6:e24112. doi: 10.1371/journal.pone.0024112
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Schreiter, S., Ding, G.C., Heuer, H., Neumann, G., Sandmann, M. , Grosch, R., et al. (2014). Влияние типа почвы на микробиом в ризосфере полевого салата. Фронт. микробиол. 5:144. doi: 10.3389/fmicb.2014.00144
Полный текст CrossRef | Google Scholar
Семенов А.М., Куприянов А.А., ван Брюгген А.Х. (2010). Перенос кишечных патогенов в последовательные места обитания в рамках микробных циклов. Микроб. Экол. 60, 239–249. doi: 10.1007/s00248-010-9663-0
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Шах Дж., Десаи П. Т., Чен Д., Стивенс Дж. Р. и Веймер Б. К. (2013). Преадаптация к холодовому стрессу у Salmonella enterica серовара Typhimurium повышает выживаемость при последующем воздействии кислотного стресса. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 79, 7281–7289. doi: 10.1128/AEM.02621-13
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Шах, Дж. Н., Десаи, П. Т., и Веймер, Б. К. (2014). Генетические механизмы, лежащие в основе патогенности холодового стресса Salmonella enterica серовара Typhimurium в культивируемых эпителиальных клетках кишечника. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 80, 6943–6953. doi: 10.1128/aem.01994-14
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Степанович С., Вукович Д., Хола В., Ди Бонавентура Г., Джукич С., Циркович И. и др. (2007). Количественное определение биопленки в титрационных микропланшетах: обзор условий тестирования и практические рекомендации по оценке производства биопленки стафилококками. АПМИС 115, 891–899. doi: 10.1111/j.1600-0463.2007.apm_630.x
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Тойвонен, П.М.А., Лу, К., Бах, С., и Делакис, П. (2012). Модуляция индуцированной раной перекиси водорода и ее влияние на судьбу Escherichia coli O157:H7 в срезанных тканях салата. J. Food Prot. 75, 2208–2212. doi: 10.4315/0362-028x.jfp-12-208
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Вестби Л.К., Моретро Т., Лангсруд С., Хейр Э. и Нессе Л.Л. (2009). Способность к образованию биопленки Salmonella коррелируют с стойкостью на заводах по производству рыбной муки и кормов. BMC Вет. Рез. 5:20. doi: 10.1186/1746-6148-5-20
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Вен А. М., Делакис П., Станич К. и Тойвонен П. (2003). Антистерильная активность отдельных фенольных кислот. Пищевой микробиол. 20, 305–311. doi: 10.1016/s0740-0020(02)00135-1
CrossRef Full Text | Google Scholar
Уилмес-Ризенберг, М. Р., Фостер, Дж. В., и Кертисс, Р. (1997). Измененный аллель rpoS способствует авирулентности Salmonella typhimurium LT2. Заразить. Иммун. 65, 203–210.
Реферат PubMed | Google Scholar
Ярон С. и Рёмлинг У. (2014). Формирование биопленки кишечными патогенами и ее роль в колонизации и сохранении растений. Микроб. Биотехнолог. 7, 496–516. doi: 10.1111/1751-7915.12186
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Доступ к базовому образованию: почти 60 миллионов детей младшего школьного возраста не посещают школу
За последние поколения мир добился больших успехов, но миллионы детей до сих пор не ходят в школу.
Макс Розер
02 ноября 2021 г.
Насколько изменилась бы ваша жизнь, если бы вы никогда не ходили в школу и не научились читать и писать?
Из 787 миллионов детей младшего школьного возраста в мире 8% не ходят в школу. ¹ Это 58,4 миллиона детей. На диаграмме показано, где они живут в мире.
Это данные ЮНЕСКО за 2019 год. Во время пандемии это число временно увеличилось, но даже на допандемическом уровне, к которому, мы надеемся, мир скоро вернется, число было слишком высоким. 58 миллионов детей, не посещающих начальную школу, означают, что 58 миллионов детей даже не имеют возможности научиться читать и писать.
Дети младшего школьного возраста, не посещающие школу ²
Почему дети не ходят в школу?
Чтобы добиться прогресса, мы должны понять, почему дети не ходят в школу.
Одной из основных причин является насилие в зонах продолжающихся конфликтов по всему миру, включая Сирию, Йемен, Судан и Нигерию. Половина детей, не посещающих школу, живут в странах, пострадавших от конфликтов. ³
Другим серьезным препятствием, часто тесно связанным с конфликтами, является бедность. ⁴
В странах с низким доходом государственные финансы на образование очень низки: ежегодные расходы в стране с высоким доходом, такой как Австрия, в раз больше, чем в 200 раз выше на одного учащегося, чем в стране с низким уровнем дохода, такой как Демократическая Республика Конго.
В худших случаях бедность требует от детей работы – чаще всего на мелких фермах – и это означает, что они рано бросают школу или вообще никогда не поступают в школу.
Если мы хотим добиться прогресса в области образования, нам нужно будет продолжить разработки, которые уменьшат конфликты и бедность.
Эти макроизменения необходимы, но в краткосрочной перспективе могут показаться неосязаемыми. Целенаправленная политика может изменить ситуацию в таких ситуациях. Одной из давно и хорошо зарекомендовавших себя мер политики является предоставление бесплатного питания в школах. Школьное питание позволяет достичь двух целей одновременно: оно обеспечивает детям лучшее питание и стимулирует родителей отправлять своих детей в школу. Научные исследования показали, что школьное питание увеличивает посещаемость школы и оказывает долгосрочное влияние на всю жизнь ребенка. Исследование, проведенное в Швеции, показало, что ученики, получавшие питание в школе в 1960-е годы имели на 3% более высокие доходы в течение жизни. ⁵ Было показано, что они даже имеют межпоколенческие преимущества: дети матерей, которые получали школьное питание в детстве, также получают пользу от программ школьного питания. ⁶
Широкий доступ даже к базовому образованию — совсем недавнее достижение. чем это было в прошлом.
Эта диаграмма показывает те же данные, что и первая, но теперь она также показывает, как изменился мир по сравнению с предыдущим поколением 20 лет назад. Доля детей, не посещающих школу, снизилась во всех регионах мира. В глобальном масштабе эта доля сократилась вдвое. Сегодня 8% детей не ходят в школу; двадцать лет назад это было 16%.
Как изменилась доля детей младшего школьного возраста, не посещающих школу, в течение жизни последнего поколения? ⁷
Поколение назад именно девочки не имели доступа к школам. Это неравенство уменьшилось, и сегодня абсолютное номер и доля мальчиков и девочек, не посещающих начальную школу, аналогичны. ⁸
До недавнего времени доступ к образованию везде был ограничен очень небольшой элитой
Это недавнее изменение является частью гораздо более масштабного развития, которое охватывает последние несколько поколений.
До этого, независимо от того, где родился ребенок, его шансы получить даже самое базовое образование были очень малы. Повсюду в мире образование было ограничено небольшой элитой. ⁹
Диаграмма показывает это глобальное развитие. Во всех странах, в том числе и в тех, где сегодня дети имеют самое лучшее образование, недавним достижением является широкий доступ даже к базовому образованию. ¹⁰
Глобальная революция в распространении грамотности
Чтение — это самый важный образовательный навык, которому может научиться маленький ребенок. Как изменилась грамотность по мере того, как все больше и больше детей получали доступ к базовому образованию?
Диаграмма показывает, что два века назад только 1 из каждых 10 взрослых умел читать и писать. С тех пор это соотношение изменилось: сегодня около 9у 10 взрослых есть этот базовый навык.
Чтобы добиться прогресса в решении мировых проблем, нам нужна сильная команда образованных людей. С этой точки зрения имеет смысл рассматривать это глобальное изменение в абсолютных цифрах. Сегодня насчитывается около 4,6 миллиарда человек, умеющих читать и писать. ¹¹ В 1800 году насчитывалось менее 100 миллионов человек с таким же навыком. У нас гораздо более сильная команда, чем когда-либо прежде.
Талант есть везде, возможности нет
Большинство когда-либо живших детей не имели возможности реализовать свой потенциал. В условиях крайней нищеты в странах, предшествовавших росту экономики, дети с большим потенциалом в конечном итоге жили в нищете. Даже самые элементарные образовательные навыки, такие как чтение и письмо, были привилегией небольшой элиты.
Трудно представить, кем могли бы стать все эти девочки и мальчики. Возможно, легче увидеть важность хотя бы базового образования, взглянув на тех, кто нас сегодня окружает, и спросив, каковы были бы их шансы без него. Что стало бы с Марией Кюри, Джейн Остин, Стивом Джобсом, Грейс Хоппер или Эйнштейном, если бы они родились в обществе, в котором дети не имели доступа к базовому образованию?
За последние поколения мир добился большого прогресса, но сегодня нашему поколению предстоит еще много работы. Почти 60 миллионов детей растут без тех возможностей, которые были у нас с вами благодаря начальной школе, которую мы смогли посещать.

No related posts.